Hochdurchsatz-Targeting von großen DNA-Fragmenten in menschlichen pluripotenten Stammzellen
2022
Leiden University Medical Center, Leiden, Niederlande
Das Einfügen großer DNA-Fragmente (>10 kb) in spezifische genomische Bereiche von Säugetierzellen ist nach wie vor eine Herausforderung. Anwendungen, die von der synthetischen Biologie bis zur Bewertung der Pathogenität von krankheitsassoziierten Varianten für Initiativen der Präzisionsmedizin reichen, würden von Verfahren, die diesen Prozess erleichtern, stark profitieren. Hier wurden die Vorteile verschiedener Klassen von ortsspezifischen Rekombinasen zusammengeführt und mit CRISPR-Cas9-vermittelter homologer Rekombination kombiniert, um eine Strategie für den stringenten ortsspezifischen Ersatz von Genomfragmenten mit einer Größe von mindestens 50 kb in menschlichen induzierten pluripotenten Stammzellen (hiPSCs) zu entwickeln. Die Autoren demonstrierten die Vielseitigkeit von STRAIGHT-IN (Serin- und Tyrosin-Rekombinase-unterstützte Integration von Genen für Hochdurchsatzuntersuchungen), indem sie (1) verschiedene Kombinationen von Fluoreszenzreportern in hiPSCs einfügten, um die Erregungs-Kontraktions-Kopplungskaskade in abgeleiteten Kardiomyozyten zu bewerten, und (2) gleichzeitig mehrere Varianten, die mit vererbten Herzrhythmusstörungen in Verbindung gebracht werden, in einen Pool von hiPSCs einfügten. STRAIGHT-IN bietet einen präzisen Ansatz zur effizienten und kostengünstigen Erzeugung genetisch angepasster hiPSC-Linien.
STRAIGHT-IN enables high-throughput targeting of large DNA payloads in human pluripotent stem cells
Richard P. Davis
Eingestellt am: 02.05.2023
[1] https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2667237522001825?via%3Dihub
